本文標題:"熒光顯微鏡物鏡的光圈(NA)和激發光的波長技術"
發布者:yiyi ------ 分類: 行業動態 ------
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熒光顯微鏡物鏡的光圈(NA)和激發光的波長技術
如果最早一次的成像可行,那么在以后所有的GFP時延性實驗中
,采用已經摸索出的設備參數,如掃描時間,激發水平和檢波器的
捕獲和篩檢,保持成像的一致性,或至少可以作為一個良好的起點
。8.設置圖像理想的像素大小。許多設備有可選擇的范圍(64像素
×64像素~2048像素×2048像素)。通常,每平方微米的像素越多
,影像就越清晰;然而,這些高像素的影像在同樣的像素設置時間
中需要更長時問的掃描,并且需要更多的儲存空間。記住為了使數
碼影像保持空問分辨率,應該調整像素的大小到每個可分解單元≥
2個像素??煞纸鈫卧?r)取決于物鏡的光圈(NA)和激發光的波長Q)
(r—o.61xz/NA)。9.為每個影像設置理想的掃描時間。像前面
提到的,研究進程的相對速度在一定程度上決定掃描時間。通過改
變像素設置時間(每個像素收集熒光的時間)改變總的掃描時間或者
平均一個像素所需要的時間(多次影像掃描后,單個像素收集的總
熒光除以掃描次數)。簡單地說,改變掃描時間在本例中不會引起
差別。然而,如果使用平均像素,則應考慮到與畫面平均(重復掃
描整張影像)相對的線平均(用平均的像素重復掃描單一的像素線,
進行平均)與平均畫面。在活細胞中,熒光標記的蛋白質可能正在
細胞中運動,而且平均畫面像素經過掃描一整張影像所需要的時間
在不同的時間點被收集。這樣將會使熒光信號在比平常更大的范圍
內丟失。
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