本文標題:"DNA制備實驗需要使用好幾種技術-生物顯微鏡"
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DNA制備實驗需要使用好幾種技術-生物顯微鏡
核酸的放射性標記
許多實驗需要使用放射性核酸,可采用好幾種技術,通過讓細
胞生長在放射性培養基中來標記生物分子,所依據的基本原理是
在可能的情況下于培養基中加入一種唯一能進入所研究分子的前
體,對DNA來說這并不復雜,因為胸腺嘧啶和胸苷只能用于DNA的
合成,因此,如果把胸苷或胸苷放入培養基中,新復制的DNA將
分別含有這是制備放射性DNA最常用的方法,有時需要的放射懷
比由放射性胸苷所提供的量要更大時,那么就使用以形式加入,
但是,在這樣做的時候,DNA和RNA以及其他含磷化合物都被標記
上了,如果只奇想放射性DNA,可以用如前所述的RNe或烯堿處理
標記的細胞,水解除去RNA,然后只須將DNA分子與游離的RNA核
苷酸分離,有好幾種簡單方法可做以這點。
對RNA唯一獨特的物質是核酸,但是,如果把放射性核糖加入培
養基中,它會被代謝,幾乎所有的含碳化合物中都會出現標記,
最好的前體是尿苷或尿苷,它可轉變灰尿苷三磷酸,然后聚合到
RNA中,但是,有些尿苷轉變為UTP,它再甲基產生胸苷三磷酸,
然后聚合到,因此用處理細胞抽取液來水解除去DNA,RNA也可以
用P標記,最后一步必須用除去DNA。
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