本文標題:"測量酶活性可用中止反應試驗-生物實驗"
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測量酶活性可用中止反應試驗-生物實驗
中止反應法測定酶活性
測量酶活性可用中止反應法(Stoppedmethod)或連續反應法中
止反應法是將酶反應按時即刻完全停止,取出反應物或產物,于以
分離,再確定產物的生成量或反應物的消耗量,算出酶活性。連續
反應法無需取樣中止反應,而是在酶反應過程中,用儀器來監測反
應進行的情形,記錄結果,算出酶活性。連續法用一個樣品可以作
多次測定,使用方便,又極易查出動力學的反應級數。若是零級反
應,產物的量當與酶活性成正比,可以立刻算出結果,但是很多酶
反應卻無法使用連續法,而中止反應法雖略感不便,幾乎任何酶都
可以用這種方法測量酶活性。
中止反應法 中止反應法是在酶和底物的恒溫反應過程中,在
到達各個予定的時間時,取出定量的樣品,使酶立刻變性,不再反
應,然后測量反應產物的生成量。由零時開始,產物的生成量至少
在開始階段的一兩分鐘內應形成直線形的增加,否則一定是測量錯
誤,或反應條件不對,才會發生偏差。欲使酶變性,最常用的方法
是加入三氯乙酸或過氯酸使酶蛋白沉淀。
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