本文標題:"測定由氨基酸-離子材料上進行氣液層析"
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比色計測定由氨基酸-離子材料上進行氣液層析
蛋白質水解物一類的樣品在低pH的情況下通過一個注
射系統被引入,并用泵打到強酸性離子交換樹脂上。具有不
同離子強度和不同pH的緩沖液在一個特殊的梯度腔中混合,
使混合后的緩沖液的pH和離子強度逐漸增加,然后用一個泵
將這種緩沖液通過柱進行洗脫。從柱上下來的洗脫液和茍三
酮顏色試劑混合,同時也引人氮氣形成一個有規律的氣泡,以
防止被洗脫的化合物過分的混合。然后混合物在油浴上加熱
顯色,通過一個冷卻的螺旋管,再通過一個調置在570毫微米
的比色計測定由氨基酸和荀三酮反應所產生的藍顏色。比色
計和一個雙道記錄儀相聯,記錄了從柱上下來的洗脫液的連
續圖形。脯氨酸和經基脯氨酸與荀三酮產生黃顏色,因此洗
脫液經過第二個調置在440毫微米的比色計來測定這二種氨
基酸的量,結果被記錄在記錄儀上。很多系統使用二根柱,第
二根柱是堿性陰離子交換樹脂,用于分離堿性氨基酸和氨。
改良過的纖維素對于大分子(如蛋白質和核蛋白)的離子
交換分離也是特別有用的。這些大分子因為它們不能滲人到
交聯的結構中,因此不能在一般的樹脂上被分離。但是,纖維
素是纖維狀的,功能基團主要都在表面,對于大分子的交換十
分有效。狡甲基纖維素(CM一纖維素,其CH2OH被CH2OCFI2
COO一基團所取代)是一種十分有用的陽離子交換劑,二乙氨
乙基纖維素(DEAE一纖維素)同樣也是一種很有用的陰離子
交換劑。最近,已廣泛地使用了在離子交換材料上進行的氣
液層析。
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