本文標題:"微生物多態激光檢測儀分析圖像顯微鏡"
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微生物多態激光檢測儀分析圖像顯微鏡
另一種解析從DNA提取物擴增出的混合16S rDNA的方法是變性梯度
膠電泳(DGGE),可以將同樣長度僅有一兩個核苷酸差異的片段分離開。
接著用rDNA與已知生物的寡核苷酸探針在電泳條帶上以雜交的方式來鑒
定與探針成功雜交的相應生物。如果需要純化,電泳膠的條帶可以經洗
脫,再擴增,確定他們的核苷酸序列。這些序列接下來可以到對應的數
據庫進行序列比對來確定是否曾被報道。第二個主要的微生物指紋圖譜
技術是末端限制性片段長度多態。t—RFLP通過限制性酶識別序列,它
根據特異性限制位點分解DNA分子。得到的片段按大小分開。單個片段
的分離是由于PCR引物中的一個帶有熒光標記,當接近這個引物的片段
遷移經過激光檢測儀時就檢測到DNA序列。雖然這是一種比較不同模版
的多態性的簡便方法,但t—RFLP對于正確分析多態性差異還比較繁瑣
。另外,DNA微陣列將被用于一個環境樣本中微生物多樣性的快速評估
這種以16S rRNA為基礎的微生物多態性評估方法的重要前提是16S
rRNA基因存在于片段中,并且有時呈多態和單基因拷貝(Klappenbach等
,2001)。其他可能影響以PCR一為基礎的16S精確評價的因素包括,潛
在的基于膜分化耐受性產生的細胞裂解能力的不同對核苷酸擴增的影響
;細胞顆粒吸附或包埋在復合培養基中使其無法收集;共提取的污染物
可能妨礙下游程序,DNA剪切導致嵌合產物,
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