本文標(biāo)題："用于顯微鏡下所觀察莢膜染色法方法的操作流程"
發(fā)布者：yiyi ------ 分類: 行業(yè)動(dòng)態(tài) ------
人瀏覽過(guò)-----時(shí)間：2012-12-11 18:33:26
莢膜染色法
目的
原理
材料與儀器
步驟與方法
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
目的
莢膜為細(xì)菌所分泌帶有黏性之物質(zhì)，主要附著于細(xì)菌之細(xì)胞壁并圍繞于菌體周圍，但并非所有的細(xì)菌均可產(chǎn)生莢膜。具有莢膜之細(xì)菌，
于宿主體內(nèi)具有可保護(hù)吞噬作用，故含有厚層莢膜之細(xì)菌被視為具有毒力且易引起疾病。以化學(xué)組成而言，莢膜物質(zhì)大多為多醣類、醣蛋白或聚勝肽，另外，
莢膜系可溶性物質(zhì)，故可因激烈沖洗而流失或脫離，因此莢膜染色法較其他各種鑑別染色法更為困難。本實(shí)驗(yàn)旨在讓學(xué)生瞭解莢膜染色之原理并學(xué)習(xí)細(xì)菌的莢膜染色法，以明白菌體之構(gòu)形。
原理
由于莢膜與染料間的親合力弱，不易著色。通常會(huì)采用負(fù)染色法即讓菌體和背景著色，而莢膜不染色，而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。
由于莢膜的含水量在90%以上，故染色時(shí)一般不加熱固定，以免莢膜皺縮變化。
材料與儀器
菌種
試劑
設(shè)備儀器及其他用具
菌種
培養(yǎng)3~5天之芽胞桿菌（此菌若以甘露醇做碳源之培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)，芽膜則較厚）。
試劑
1%結(jié)晶紫
6%葡萄糖液
墨汁
甲醇
設(shè)備儀器及其他用具
酒精燈（或本生燈）
接種環(huán)（或接種針）
染色架
濾紙
拭鏡紙
玻片
步驟與方法
染色方法之操作流程如下：
制備菌液：先滴入l滴6%葡萄糖液于載玻片一端，接著挑取少量芽胞桿菌菌液與其充分混合，再加入1滴墨水，將三者充分混勻后即為實(shí)驗(yàn)用菌液。
制作玻片標(biāo)本：以左手執(zhí)玻片，右手另拿一邊緣光滑的載玻片，將載玻片的一邊與菌液接觸，使菌液沿玻片接觸處散開(kāi)，然后以30度角迅速且均勻地將菌液拉向玻片的一端，使菌液呈現(xiàn)薄膜狀態(tài)。
乾燥：置于空氣中使其自然乾燥。
固定：以甲醇浸濕玻片，固定1分鐘后將玻片取出并將甲醇倒掉。
染色：將制備完成后之玻片標(biāo)本置于染色架上，接著滴上結(jié)晶紫，以結(jié)晶紫染色1~2分鐘。
水洗：染色后，將玻片之染色涂抹面向下，以自來(lái)水輕洗，直到?jīng)_洗出之液體透明無(wú)色為止。
乾燥：將玻片上多馀的水分輕輕甩乾，并可利用濾紙將水分吸乾，接著置于無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)使其自然風(fēng)乾備用。
顯微鏡觀察：以顯微鏡進(jìn)行菌體之觀察（可先以低倍找出菌體后，再以高倍觀察）。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
加蓋玻片時(shí)，注意不可有氣泡產(chǎn)生，否則會(huì)影響觀察。
制作玻片標(biāo)本時(shí)，儘可能的要讓菌液均勻分布并且不可太厚，否則將影響染色。
乾燥時(shí)，不可放于火焰下乾燥。若要放于火焰下乾燥，則需放于火焰較高處進(jìn)行，不可使玻片發(fā)熱為原則。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
請(qǐng)畫(huà)出于顯微鏡下所觀察到之菌體鏡象，并注明各部位的名稱。
預(yù)期結(jié)果：背景灰色，菌體呈現(xiàn)紫色，莢膜則呈現(xiàn)一清晰的透明圈。
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